Kit RNAprep Pure Cell/Batteri
Caratteristiche
■ Tamponi e protocolli ottimizzati per cellule in coltura e campioni di batteri rendono il processo semplice e conveniente.
■ L'esclusiva DNasi I riduce al minimo la contaminazione del DNA genomico.
■ Le esclusive colonne di filtrazione CS senza RNasi eliminano altre contaminazioni.
■ L'RNA di elevata purezza e pronto all'uso è adatto per applicazioni a valle sensibili.
■ Nessuna estrazione con fenolo/cloroformio, nessuna precipitazione di LiCl ed etanolo, nessuna centrifugazione in gradiente di CsCl sono necessarie, il che rende il processo sicuro e affidabile.
Applicazioni
■ RT-PCR.
■ Macchia del nord, Macchia del punto.
■ PCR in tempo reale.
■ Analisi del chip.
■ Screening PolyA, traduzione in vitro, analisi della protezione RNasi e clonazione molecolare.
Tutti i prodotti possono essere personalizzati per ODM/OEM. Per dettagli,fare clic su Servizio personalizzato (ODM/OEM)
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Materiale: cellule Jurkat umane (1×106 ) Metodo: l'RNA totale delle cellule Jukat umane è stato isolato utilizzando il kit RNAprep Pure Cell/Bacteria. Risultati: vedere l'immagine dell'elettroforesi su gel di agarosio sopra. Sono stati caricati 2-4 μl di 50 μl di eluati per corsia. L'elettroforesi è stata condotta a 6 V/cm per 30 min su gel di agarosio all'1%. |
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Materiale: TOP10 E.coli (1×108) Metodo: l'RNA totale di TOP10 E.coli è stato isolato utilizzando il kit RNAprep Pure Cell/Bacteria. Risultati: vedere l'immagine dell'elettroforesi su gel di agarosio sopra. Sono stati caricati 2-4 μl di 50 μl di eluati per corsia. L'elettroforesi è stata condotta a 6 V/cm per 30 min su gel di agarosio all'1%. |
A-1 Lisi cellulare o omogeneizzazione non sufficiente
---- Ridurre l'utilizzo del campione, aumentare la quantità di tampone di lisi, aumentare l'omogeneizzazione e il tempo di lisi.
A-2 La quantità di campione è troppo grande
---- Ridurre la quantità di campione utilizzato o aumentare la quantità di tampone di lisi.
A-1 Lisi o omogeneizzazione cellulare insufficiente
---- Ridurre l'utilizzo del campione, aumentare la quantità di tampone di lisi, aumentare l'omogeneizzazione e il tempo di lisi.
A-2 La quantità di campione è troppo grande
----Si prega di fare riferimento alla capacità di elaborazione massima.
L'RNA A-3 non viene eluito completamente dalla colonna
---- Dopo aver aggiunto acqua RNasi-Free, lasciarla agire per alcuni minuti prima di centrifugare.
A-4 Etanolo nell'eluente
---- Dopo il risciacquo, centrifugare nuovamente e rimuovere il più possibile il tampone di lavaggio.
A-5 Il terreno di coltura cellulare non è stato completamente rimosso
---- Quando si raccolgono le cellule, assicurarsi di rimuovere il più possibile il terreno di coltura.
A-6 Le cellule immagazzinate in RNAstore non sono efficacemente centrifugate
----La densità di RNAstore è maggiore del mezzo di coltura cellulare medio; quindi la forza centrifuga dovrebbe essere aumentata. Si consiglia di centrifugare a 3000x g.
A-7 Basso contenuto di RNA e abbondanza nel campione
---- Utilizzare un campione positivo per determinare se la bassa resa è causata dal campione.
A-1 Il materiale non è fresco
---- I tessuti freschi devono essere conservati immediatamente in azoto liquido o messi immediatamente nel reagente RNAstore per garantire l'effetto di estrazione.
A-2 La quantità di campione è troppo grande
---- Ridurre la quantità di campione.
Contaminazione da A-3 RNasin
----Sebbene il tampone fornito nel kit non contenga RNasi, è facile contaminare l'RNasi durante il processo di estrazione e deve essere maneggiato con cura.
A-4 Inquinamento da elettroforesi
---- Sostituire il tampone per elettroforesi e assicurarsi che i materiali di consumo e il tampone di caricamento siano privi di contaminazione da RNasi.
A-5 Troppo carico per l'elettroforesi
---- Ridurre la quantità di caricamento del campione, il caricamento di ciascun pozzetto non deve superare i 2 μg.
A-1 La quantità di campione è troppo grande
---- Ridurre la quantità di campione.
A-2 Alcuni campioni hanno un alto contenuto di DNA e possono essere trattati con DNasi.
----Eseguire un trattamento con DNasi privo di RNasi sulla soluzione di RNA ottenuta e l'RNA può essere utilizzato direttamente per esperimenti successivi dopo il trattamento o può essere ulteriormente purificato con kit di purificazione dell'RNA.
Per vetreria, cottura a 150°C per 4 h. Per i contenitori di plastica, immersi in 0,5 M NaOH per 10 min, quindi risciacquati accuratamente con acqua priva di RNasi e quindi sterilizzati per rimuovere completamente l'RNasi. I reagenti o le soluzioni utilizzati nell'esperimento, in particolare l'acqua, devono essere privi di RNasi. Utilizzare acqua priva di RNasi per tutte le preparazioni dei reagenti (aggiungere acqua a una bottiglia di vetro pulita, aggiungere DEPC a una concentrazione finale dello 0,1% (V/V), agitare durante la notte e autoclavare).
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