Reagente universale TRnzol
Caratteristiche
■ Elevata flessibilità: intervallo selvaggio del volume del campione iniziale, adatto per l'estrazione di campioni di grandi volumi in una singola reazione.
■ Alta resa: il metodo di precipitazione massimizza la resa di RNA nel campione.
■ Ampio utilizzo: adatto per molti campioni diversi come tessuti vegetali e animali, cellule in coltura, sangue, fluidi corporei, ecc.
■ Operazione rapida: il DNA genomico può essere ottenuto entro 1 ora.
Specifiche
Tipo: Basato sulle precipitazioni
Campione: Virus, batteri, funghi, animali, tessuti vegetali, cellule coltivate e fluidi corporei.
Obbiettivo: RNA
Tempo di funzionamento: ~1 ora
Applicazioni: Il reagente TRNzol Universal riduce al minimo la contaminazione di impurità come DNA e proteine nell'RNA totale purificato e può essere utilizzato direttamente per vari esperimenti di biologia molecolare come Northern Blot, Dot Blot, screening PolyA, traduzione in vitro, analisi di protezione RNasi, costruzione di librerie di cDNA , RT-PCR, PCR in tempo reale e sequenziamento ad alto rendimento.
Tutti i prodotti possono essere personalizzati per ODM/OEM. Per dettagli,fare clic su Servizio personalizzato (ODM/OEM)
Metodo: 30 mg di tessuto di fegato di ratto, 100 mg di foglie di riso sono state raccolte mediante macinazione con azoto liquido; 1×106Le cellule in coltura di HepG2 e 700 μl di terreno di coltura di Saccharomyces Cerevisiae (OD600=0,9) sono stati raccolti mediante centrifugazione. Ad ogni aliquota di campione è stato aggiunto 1 ml di TRNzol Universal Reagent di TIANGEN e i relativi prodotti del fornitore L e T e l'estrazione dell'RNA è stata eseguita seguendo i protocolli forniti da ciascun fornitore. Il volume di eluizione era rispettivamente di 80 μl, 50 μl, 30 μl e 30 μl per i quattro campioni. Sono stati caricati 3 μl di eluato per corsia.
MIII: TIANGEN Marker III;
L'elettroforesi è stata condotta a 6 V/cm per 30 min su agarosio all'1%.
Risultati: TIANGEN TRNzol Universal Reagent è in grado di estrarre RNA di elevata purezza e buona integrità da fegato di ratto, foglie di riso, cellule coltivate e campioni di lievito, con elevata efficienza. La qualità dell'RNA è paragonabile o leggermente superiore a quella dei prodotti L e T del fornitore.
A-1 Lisi cellulare o omogeneizzazione non sufficiente
---- Ridurre l'utilizzo del campione, aumentare la quantità di tampone di lisi, aumentare l'omogeneizzazione e il tempo di lisi.
A-2 La quantità di campione è troppo grande
---- Ridurre la quantità di campione utilizzato o aumentare la quantità di tampone di lisi.
A-1 Lisi o omogeneizzazione cellulare insufficiente
---- Ridurre l'utilizzo del campione, aumentare la quantità di tampone di lisi, aumentare l'omogeneizzazione e il tempo di lisi.
A-2 La quantità di campione è troppo grande
----Si prega di fare riferimento alla capacità di elaborazione massima.
L'RNA A-3 non viene eluito completamente dalla colonna
---- Dopo aver aggiunto acqua RNasi-Free, lasciarla agire per alcuni minuti prima di centrifugare.
A-4 Etanolo nell'eluente
---- Dopo il risciacquo, centrifugare nuovamente e rimuovere il più possibile il tampone di lavaggio.
A-5 Il terreno di coltura cellulare non è stato completamente rimosso
---- Quando si raccolgono le cellule, assicurarsi di rimuovere il più possibile il terreno di coltura.
A-6 Le cellule immagazzinate in RNAstore non sono efficacemente centrifugate
----La densità di RNAstore è maggiore del mezzo di coltura cellulare medio; quindi la forza centrifuga dovrebbe essere aumentata. Si consiglia di centrifugare a 3000x g.
A-7 Basso contenuto di RNA e abbondanza nel campione
---- Utilizzare un campione positivo per determinare se la bassa resa è causata dal campione.
A-1 Il materiale non è fresco
---- I tessuti freschi devono essere conservati immediatamente in azoto liquido o messi immediatamente nel reagente RNAstore per garantire l'effetto di estrazione.
A-2 La quantità di campione è troppo grande
---- Ridurre la quantità di campione.
Contaminazione da A-3 RNasin
----Sebbene il tampone fornito nel kit non contenga RNasi, è facile contaminare l'RNasi durante il processo di estrazione e deve essere maneggiato con cura.
A-4 Inquinamento da elettroforesi
---- Sostituire il tampone per elettroforesi e assicurarsi che i materiali di consumo e il tampone di caricamento siano privi di contaminazione da RNasi.
A-5 Troppo carico per l'elettroforesi
---- Ridurre la quantità di caricamento del campione, il caricamento di ciascun pozzetto non deve superare i 2 μg.
A-1 La quantità di campione è troppo grande
---- Ridurre la quantità di campione.
A-2 Alcuni campioni hanno un alto contenuto di DNA e possono essere trattati con DNasi.
----Eseguire un trattamento con DNasi privo di RNasi sulla soluzione di RNA ottenuta e l'RNA può essere utilizzato direttamente per esperimenti successivi dopo il trattamento o può essere ulteriormente purificato con kit di purificazione dell'RNA.
Per vetreria, cottura a 150°C per 4 h. Per i contenitori di plastica, immersi in 0,5 M NaOH per 10 min, quindi risciacquati accuratamente con acqua priva di RNasi e quindi sterilizzati per rimuovere completamente l'RNasi. I reagenti o le soluzioni utilizzati nell'esperimento, in particolare l'acqua, devono essere privi di RNasi. Utilizzare acqua priva di RNasi per tutte le preparazioni dei reagenti (aggiungere acqua a una bottiglia di vetro pulita, aggiungere DEPC a una concentrazione finale dello 0,1% (V/V), agitare durante la notte e autoclavare).
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