TGuide S96 Kit RNA sangue/cellule/tessuto

A-1 Lisi cellulare o omogeneizzazione non sufficiente

---- Ridurre l'utilizzo del campione, aumentare la quantità di tampone di lisi, aumentare l'omogeneizzazione e il tempo di lisi.

A-2 La quantità di campione è troppo grande

---- Ridurre la quantità di campione utilizzato o aumentare la quantità di tampone di lisi.

A-1 Lisi o omogeneizzazione cellulare insufficiente

---- Ridurre l'utilizzo del campione, aumentare la quantità di tampone di lisi, aumentare l'omogeneizzazione e il tempo di lisi.

A-2 La quantità di campione è troppo grande

----Si prega di fare riferimento alla capacità di elaborazione massima.

L'RNA A-3 non viene eluito completamente dalla colonna

---- Dopo aver aggiunto acqua RNasi-Free, lasciarla agire per alcuni minuti prima di centrifugare.

A-4 Etanolo nell'eluente

---- Dopo il risciacquo, centrifugare nuovamente e rimuovere il più possibile il tampone di lavaggio.

A-5 Il terreno di coltura cellulare non è stato completamente rimosso

---- Quando si raccolgono le cellule, assicurarsi di rimuovere il più possibile il terreno di coltura.

A-6 Le cellule immagazzinate in RNAstore non sono efficacemente centrifugate

----La densità di RNAstore è maggiore del mezzo di coltura cellulare medio; quindi la forza centrifuga dovrebbe essere aumentata. Si consiglia di centrifugare a 3000x g.

A-7 Basso contenuto di RNA e abbondanza nel campione

---- Utilizzare un campione positivo per determinare se la bassa resa è causata dal campione.

A-1 Il materiale non è fresco

---- I tessuti freschi devono essere conservati immediatamente in azoto liquido o messi immediatamente nel reagente RNAstore per garantire l'effetto di estrazione.

A-2 La quantità di campione è troppo grande

---- Ridurre la quantità di campione.

Contaminazione da A-3 RNasin

----Sebbene il tampone fornito nel kit non contenga RNasi, è facile contaminare l'RNasi durante il processo di estrazione e deve essere maneggiato con cura.

A-4 Inquinamento da elettroforesi

---- Sostituire il tampone per elettroforesi e assicurarsi che i materiali di consumo e il tampone di caricamento siano privi di contaminazione da RNasi.

A-5 Troppo carico per l'elettroforesi

---- Ridurre la quantità di caricamento del campione, il caricamento di ciascun pozzetto non deve superare i 2 μg.

A-1 La quantità di campione è troppo grande

---- Ridurre la quantità di campione.

A-2 Alcuni campioni hanno un alto contenuto di DNA e possono essere trattati con DNasi.

----Eseguire un trattamento con DNasi privo di RNasi sulla soluzione di RNA ottenuta e l'RNA può essere utilizzato direttamente per esperimenti successivi dopo il trattamento o può essere ulteriormente purificato con kit di purificazione dell'RNA.

Per vetreria, cottura a 150°C per 4 h. Per i contenitori di plastica, immersi in 0,5 M NaOH per 10 min, quindi risciacquati accuratamente con acqua priva di RNasi e quindi sterilizzati per rimuovere completamente l'RNasi. I reagenti o le soluzioni utilizzati nell'esperimento, in particolare l'acqua, devono essere privi di RNasi. Utilizzare acqua priva di RNasi per tutte le preparazioni dei reagenti (aggiungere acqua a una bottiglia di vetro pulita, aggiungere DEPC a una concentrazione finale dello 0,1% (V/V), agitare durante la notte e autoclavare).